管式离心机剪切力对菌体蛋白收率和浊度的影响

菌体破碎裂解液的澄清工艺是以去除细胞碎片和核酸为主，而这两种物质在偏碱性的裂解缓冲液中一般都是带有负电荷，这可能是由于吸附溶液中的离子或者是本身偏酸的等电点电离导致的。钙离子的絮凝是钙离子静电作用吸附胶体外表的负离子，接着架桥作用，把颗粒连接成一种疏松的、网络状的聚集形态，即造成了絮凝体。形成的大颗粒沉淀再进行离心便可实现对破碎裂解液的澄清。钙离子对破碎裂解液絮凝澄清效果的研究分为三个部分:
一方面要考察钙离子的加入量对澄清效果的影响以及磷酸氢二钠的加入量对絮凝工艺的影响;

另一方面要考察料液性质对澄清效果的影响以及絮凝工艺对料液稳定性的相对影响;
第三，鉴于絮凝澄清工艺受设备参数影响较明显，增加考察关于放大过程的模拟评价，相比小试优化使用的台式离心机，试生产所使用管式离心机的剪切力作用对蛋白和絮凝效果是否有一定程度的影响，将使用具有剪切力的仪器模拟进行效果评估。因为，破碎裂解液的杂蛋白成分复杂，絮凝工艺只能在一定程度上少量去除杂蛋白甚至目的蛋白，进而不能直接使用检测蛋白浓度计算澄清收率进行评估，在后续的试验中我们得知管式离心机剪切力是造成蛋白的断裂或变性;离心样品浑浊度严重上升说明可能是剪切力造成断裂新形成的杂质或剪切力破坏了未牢固结合的絮凝大颗粒，尤其表现在20mmol/L氯化钙浓度絮凝样品。由此进- -步确认氯化钙浓度的最佳操作值为30mmol/L 氯化钙和剪切力确实降低絮凝澄清样品的收率和澄清度。而且，虽然可能管式离心机产生的剪切力没有模拟剪切力的强烈，但在一定程度上将影响蛋白收率和样品浊度，可以增加离心后过滤操作去除部分颗粒。